影響PCR擴(kuò)增結(jié)果的因素

1、引物：引物到用戶(hù)手頭前都是以干粉形式存在的，干粉很容易丟掉，引物溶解后可以測(cè)定一下OD，將所有引物的濃度調(diào)整到一致，對(duì)實(shí)驗(yàn)有一定幫助。2、高溫聚合酶：高溫聚合酶是非常穩(wěn)定的，除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶擴(kuò)增是有差異的，活性定量和標(biāo)示未必相同。選用表現(xiàn)一貫穩(wěn)定的酶，而不是最便宜的。3、緩沖液：緩沖液一般不容易出問(wèn)題，只是使用前需要徹底融化混勻使用。4、溫度：變性和退火溫度是主要需要考慮的。5、模板：PCR 的關(guān)鍵之一，模板不是越多越好。6、dNTP： dNTP是PCR擴(kuò)增體系中最不穩(wěn)定的，反復(fù)凍融會(huì)使dNTP發(fā)生降解。7、Mg2+：是TAQ活性所必須的，濃度過(guò)高過(guò)低對(duì)反應(yīng)都有比較大的影響。過(guò)低，合成效率會(huì)下降，過(guò)高，非特異性會(huì)加大。

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導(dǎo)讀1、引物：引物到用戶(hù)手頭前都是以干粉形式存在的，干粉很容易丟掉，引物溶解后可以測(cè)定一下OD，將所有引物的濃度調(diào)整到一致，對(duì)實(shí)驗(yàn)有一定幫助。2、高溫聚合酶：高溫聚合酶是非常穩(wěn)定的，除非有蛋白酶的污染。但是不同公司提供的酶擴(kuò)增是有差異的，活性定量和標(biāo)示未必相同。選用表現(xiàn)一貫穩(wěn)定的酶，而不是最便宜的。3、緩沖液：緩沖液一般不容易出問(wèn)題，只是使用前需要徹底融化混勻使用。4、溫度：變性和退火溫度是主要需要考慮的。5、模板：PCR 的關(guān)鍵之一，模板不是越多越好。6、dNTP： dNTP是PCR擴(kuò)增體系中最不穩(wěn)定的，反復(fù)凍融會(huì)使dNTP發(fā)生降解。7、Mg2+：是TAQ活性所必須的，濃度過(guò)高過(guò)低對(duì)反應(yīng)都有比較大的影響。過(guò)低，合成效率會(huì)下降，過(guò)高，非特異性會(huì)加大。